- Air mani yang diperoleh diencerkan dengan NaCl physiologis atau bahan pengencer lain dengan perbandingan 1:10, dan segera dilakukan inseminasi.
- Untuk melakukan inseminasi buatan diperlukan 2 orang pelaksana, yakni : Orang pertama memegang ayam betina yang akan di inseminasi pada bagian antara kedua paha dengan tangan kiri dan menjepitnya di ketiak dengan kepala ayam menghadap belakang. Tangan kanan mencari vagina dengan mengadakan tekanan pada bagian abdomen sekitar kloaka dengan ibu jari dan jari telunjuk.
- Stelah tampak ada dua lubang didalam kloakanya (sebelah kanan adalah lubang akhir dari usus dan sebelah kiri adalah vagina), naka air mani tersebut dimasukkan dalam lubang vagina sekurang-kurangnya 0,05 cc dengan menggunakan spuit 1 cc atau spuit tuberculine kira-kira sedalam 2 cm. Bersamaan dengan ini tekanan pada abdomen (perut) ayam dikurangi, agar air mani yang masuk tidak keluar lagi.
- Inseminasi buatan ini dilakukan dengan interval seminggu sekali pada setiap betina.
